Диагностика СПИДа проводится с учетом данных эпидемиологического анамнеза, клинических симптомов, оценки иммунного статуса больных и обнаружения специфических антител в крови, а в ряде случаев - и получения культуры ВИЧ.
Лабораторная диагностика. Диагноз СПИД не устанавливается без лабораторного подтверждения ВИЧ-инфекции. Специфическая диагностика ВИЧ-инфекции основана на определении специфических антигенов, фрагментов ДНК и РНК, действия вирусов (культуры вирусов), а также детекции антител (суммарных и к отдельным антигенам, эпитопам антигенов вируса) классов G и М.
Выявление ВИЧ методом культуры клеток. Эта техника использовалась ранее для установления ВИЧ-1 как причину СПИД. Мононуклеарные клетки ВИЧ-инфицированных пациентов культивировали в питательной среде вместе с лимфоцитами здоровых доноров, предварительно стимулированных ФГА с добавлением эмбриональной телячьей сыворотки L-глютамина, интерлейкина-2. Идентификация положительных культур возможна в течение 10 дней. Отрицательный результат определяется за 1-1,5 мес.
Количественные методы культивирования клеток. Метод, измеряющий относительное количество вируса в клетках или сыворотке. Техника культивирования такая же, как описано ранее. Для определения количества вируса 10-20x6 лимфоцитов донора культивируются с последовательно уменьшающимися количествами (10x6; 10x5; 10x4; 10x3; 10x2; 10x1) мононуклеарных клеток лиц, инфицированных ВИЧ или разведениями плазмы, полученной от пациентов. Положительная культура с наименьшим количеством клеток или наибольшим разведением плазмы (выявление р24 или др.) после 7 и 14 дней культивирования характеризует количество вируса, имеющегося у пациента.
Выявление антигенов ВИЧ. Определение р24 с помощью твердофазного иммуноферментного метода с нанесением на твердую фазу антител к данному антигену.
Определение провирусной ДНК, геномной Им-РНК ВИЧ. Возможно использование методов амплификации специфических последовательностей ДНК (в случае РНК вначале проводится обратная транскрипция). Чувствительность данного метода очень высока. С его помощью искомые фрагменты ДНК можно выявить, используя одну клетку. Вместе с тем высокая чувствительность служит причиной ложноположительных результатов при контаминации материала и реагентов.
Определение антител. Антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 можно определить, используя различные методы (агглютинационные, иммунопреципитации, иммунофлюоресценции, иммуноферментные и др.), тест-системы. Предложен метод подтверждения ВИЧ-инфекции с использованием комбинации трех тестов.
Иммуноблот. Используется чаще всего для проведения подтверждения инфицирования ВИЧ. При этом анализе комплекс белков ВИЧ фракционируют в полиакриламидном геле электрофорезом. На гель помещают нитроцеллюлозную мембрану и методом электроэлюции переносят на нее разделенные белки ВИЧ. Учитывают результаты по выявлению в анализируемых сыворотках антител к отдельным антигенам ВИЧ (положительные - если определяется хотя бы один антиген env региона).
Следует отметить, что пациенты, инфицированные ВИЧ, нуждаются в динамическом наблюдении. Все лабораторные и клинические данные должны анализироваться комплексно, а при необходимости перепроверяться.
Постановка диагноза "ВИЧ-инфекция". Первичный диагноз основан на результатах лабораторных исследований с использованием подтверждающих иммуноферментных тест-систем (диагностирующих наличие антител к ВИЧ) фирм ABBOT (коэффициент 6,5 и выше), Genelavia mixt (коэффициент 10 и выше), Vironostika Uniform-2 (коэффициент 6 и выше). Если по результатам исследований коэффициенты определяются ниже указанных уровней, в лаборатории проводятся дополнительные анализы того же образца сыворотки на тест-системах Serodia. Кроме того, рекомендуется повторное исследование сыворотки крови пациента через 2 нед. - 1,5 мес.
