Единственным надежным методом диагностики гранулемы является обнаружение телец Донована в материале, взятом из краев язв с помощью кюретки или пинцета.
Бактериоскопическое исследование. Мазки готовят обычным путем на предметном стекле и окрашивают по методу Романовского — Гимзы или Райту.
В окрашенных мазках в световом микроскопе обычно видны эритроциты, нейтрофильные гранулоциты, плазматические клетки и лимфоциты. Наиболее характерно в цитологической картине наличие больших рассеянных мононуклеарных клеток с круглым, овальным или бобовидным ядром. Размер макрофагов варьирует от 20 до 60 мкм (иногда 90 мкм) в диаметре. Тельца Донована сравнительно легко обнаруживаются внутри таких клеток. Они бывают двух типов — инкапсулированные и неинкапсулированные.
Окрашенные инкапсулированные тельца Донована имеют овальную или бобовидную форму, 1—1,5 мкм в длину и 0,5—0,7 мкм в ширину, окружены хорошо различимой плотной розовой капсулой. Тело бактерии окрашено в голубой цвет, в бацилле видны темно-синие или черные хроматиновые включения, которые могут быть круглыми или нитевидными и располагаются в центральной, периферической части либо биполярно. Неинкапсулированныемикроорганизмы имеют вид мелких хорошо окрашенных телец различной формы: кокков, диплококков, коротких палочек. Размеры этих незрелых молодых форм 0,6—1 мкм. Как инкапсулированные, так и неинкапсулированные тельца Донована располагаются внутри макрофагов в виде гроздей, россыпей или цист. При этом в одной цисте могут встречаться тельца обеих форм.
Культуру телец Calymmatobacterium granulomatis получают при заражении куриных эмбрионов, а также путем выращивания на свежей среде. В последнем случае обычно через 24 ч появляются влажные блестящие колонии. Возбудитель донованоза не разжижает желатин, дает отрицательную реакцию на индол, обесцвечивает лакмусовую бумагу, сбраживает и коагулирует молоко.
Тельца Донована обнаруживаются в очагах поражения кожи и подкожной основы в 90—95 % случаев. Они могут отсутствовать или определяются с большим трудом при острых деструктивных поражениях, вызванных присоединившейся фузоспириллезной инфекцией, при очень ранних проявлениях болезни, а также рубцово-келлоидных формах ее.
Важное значение имеет также гистологическое исследование. Существенные гистологические изменения при донованозе — гиперплазия краевого эпидермиса и массивная клеточная инфильтрация дермы, где рассеяны моноциты, содержащие Calymmatobacterium granulomatis. Характерными особенностями изменения краевого эпителия являются: выраженный акантоз, чрезмерное увеличение межклеточных соединений с образованием «островков» экссудата, содержащих плазматические клетки и незначительное количество нейтрофильных сегментоядерных гранулоцитов, эозинофилов, моноцитов, лимфоцитов; типична псевдоэпителиальная гиперплазия. Чрезмерная неправильная пролиферация эпителия в некоторых случаях напоминает злокачественное новообразование.
К специфическим признакам заболевания относится состояние дермы, в которой определяют массивную клеточную реакцию на тельца Донована, в результате чего происходит избыточный рост грануляционной ткани, а новообразованные кровеносные сосуды располагаются в виде полос. При гистологическом исследовании ранних поражений обнаруживают интенсивную клеточную инфильтрацию в дерме, десквамацию поверхностных и отек глубоких слоев эпидермиса. С увеличением клеточной инфильтрации в сосочках дермы слои эпителия повреждаются и исчезают. Кожа и подкожная основа часто обильно инфильтрированы гистиоцитами, плазмоцитами, лейкоцитами, в меньшей мере — лимфоцитами и небольшим количеством фибробластов. Среди таких инфильтратов обнаруживают небольшие абсцессы, состоящие из нейтрофильных сегментоядерных гранулоцитов. В препаратах встречаются также светлые клетки — макрофаги со слабоокрашенным ядром и пенистой цитоплазмой, включающие большое количество возбудителей. Эти мононуклеарные клетки рассеяны в различных количествах в верхних слоях пораженной ткани и в сосочковом слое дермы, их размеры варьируют от 20 до 90 мкм в диаметре. Ядра клеток пикнотичны и расположены эксцентрически. Их легко обнаружить при окраске по методу Романовского — Гимзы (приобретают насыщенный красный цвет), а также гематоксилин-эозином.
В более поздних стадиях заболевания, особенно при гипертрофических формах, наблюдается чрезмерное увеличение волокнистой соединительной ткани, в щелях между волокнами видны плазмоциты, лимфоциты, мононуклеары. При склеротической или рубцовой форме заболевания в гистологической картине преобладают толстые пучки гиалинизированных коллагеновых волокон.
Дифференциальная диагностика проводится с сифилисом, для исключения которого необходимы исследования на наличие бледной трепонемы и серологический контроль; мягким шанкром — подтверждается коротким инкубационным периодом (3—5 дней), множественными болезненными, легко кровоточащими язвами с подрытыми и неровными краями, изъеденным дном, покрытым гнойным налетом, обнаружением стрептобациллы Дюкрея—Унны—Петерсона в отделяемом из язвы; лимфогранулематозом паховым, при котором первично поражаются лимфатические узлы (паховые, половых органов и прямой кишки), возбудитель — отдельные штаммы Chlamydia trachomatis, которые выявляют по характерным внутриклеточным включениям в культуре клеток или в куриных эмбрионах, положительной внутрикожной реакции Фрея и формо-ловой реакции Гате—Папакостаса, повышению температуры тела, головной боли, боли в суставах; тропический филяриатоз — вызывает слоновость половых органов, при этом заболевании язвы не образуются, диагностике помогают наличие частых приступов лихорадки в анамнез, опухолевидное утолщение тканей, обнаружение микрофилярий в крови больных; туберкулезом половых органов — туберкулезные язвы в области половых органов не схожи с язвами при донованозе, при биопсии обнаруживают казеоз, гигантские клетки и микобактерии; урогенитальным амебиазом — амебиазные поражения наружных половых органов внешне напоминают донованозные, может наблюдаться одновременное или последовательное заражение амебиазом и донованозом (для исключения амебиаза исследуют нативные неокрашенные мазки, в которых находят активную, живую Entamoeba hystolytica).
